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In article <2675@tukisap.idlabh.go.jp> ohgiya@tukisap.idlabh.go.jp (ohgiya) writes:

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 |　ｆｊ初投稿、工業技術院北海道工業開発試験所の扇谷です。
 |　（フルネームを書かないと、「工技院北開試」ではわからないでしょうね）

大石＠電総研（同じく工業技術院の組織）です。私もこの件については
詳しい方に教えていただきたく思います。以下には私の乏しい経験に
基づいたことを書きます。

 |　autoclaveのスレッドに少し話が出ていたのですが、ＲＮＡを取るときの溶液
 |やチューブ、チップ等からのＲＮａｓｅの除去はどのようにしていらっしゃい
 |ますか。「molecular cloning」や「current protocols in molecular biolog
 |y」などの本では、溶液類はＤＥＰＣを添加後、しばらくしてからオートクレー
 |ブで余分なＤＥＰＣを飛ばす、チューブは滅菌済みのやつならそのままでＯＫ
 |と書かれていますが。
 |
 |　私は、大学時代に次のように教わったので、そのままやってますが、どうも
 |不安です。
 |(1) 溶液類、チップ、エッペンチューブ、（超）遠心チューブなど
 |　　　　１２１度、４０分オートクレーブ（ＤＥＰＣ処理無し）
 |(2) 電気泳動ラック、送液チューブなどのオートクレーブできないもの
 |　　　　１０％過酸化水素水に一晩漬け、上記のように処理した水で洗う
 |(3) ガンマ線滅菌済みプラスチック類
 |　　　　そのまま
 |　ＤＥＰＣを使わないのは、有害なのと、ＤＥＰＣが残ってしまうとＲＮＡが
 |修飾されてしまう（本当かどうかは良く知りません）ためだと言われたように
 |思います。
 
私も同じような理由で使っていません。しかもオートクレーブは普通の時間しか
かけていないし、泳動ラックも洗いっぱなしです（本当はよくないと思っている
のですが）。後の仕事がノーザンだけならこれでも何とかなるんじゃないですか。

 |　ＤＥＰＣを使った方がいいとは思っているのですが、どうも踏み切れないで
 |います。ノーザンの後、１８Ｓや２８Ｓがテーリングしているのを見る度、や
 |っぱりＲＮａｓｅかなあ、と悩んでいますので、これら溶液や器具の処理法に
 |ついて教えていただけるとうれしいです。

テーリングですか？分解なら頭の方に出てきませんか？
テーリングならロードする量、濃度などを検討せよと書いた本があった気が
します。私はサブマリンを持っていなかったころ、泳動中にゲル表面が乾いて
テーリングした覚えがありますが、時々バッファーを振りかけてやると収まり
ました(^_^);;。

 |　また、ＲＮＡの取り方については、スタンダードなグアニヂンチオシアネー
 |トとセシウムクロライド法でやっていますが、ＡＧＰＣ法の方が良いでしょう
 |か。

私の場合は方法と目的が合致した（多数の試料を同時処理できる）ので
ＡＧＰＣ法を使っていますが、セシウムクロライドで取ったほうがきれいだ
と世間一般では言われていると思います。ただ前にも書いたように、ノーザン
ならＡＧＰＣ法で取ったものが十分使えます。

RNAは取ってすぐノーザンにかけておられるのでしょうか？そうでなければ
保存の問題が大きいと思います。私はついこの間まで水に溶かしたまま
-80℃に置いておいたのですが、これだと２、３ケ月で分解してきますね。
友人に聞くとエタ沈か、泳動用に変性させた状態で保存するのがよいとの
ことでした。

では詳しい方、私からも宜しくお願いします。

大石高生＠工業技術院電子技術総合研究所情報科学部脳機能研究室
toishi@etl.go.jp   tel0298-58-5843